細胞計數是細胞培養過程中的重要步驟，“傳統的細胞計數方法"是在顯微鏡下使用血細胞計數板人工計數。這里博大博聚為大家介紹下傳統細胞計數的詳細的步驟，供大家參考。

1、準備好血細胞(bao)計數板

1)     先用無水乙醇清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

2)     再用純水清潔血細胞計數板表面和蓋玻片；

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血細胞計數板的計數池上方蓋上專用的蓋玻片。

注意：最好不要擦拭血細胞計數板的計數池(chi)，防止標識線損壞。

2、制備細胞懸(xuan)液

1)     貼壁生長的細胞，使(shi)用(yong)胰酶消化(hua)的方法使(shi)細胞從培養瓶表面脫落；

2)     漩渦混勻或使用移液器反復吹吸細胞懸液，盡量減少細胞團簇；

3)     懸(xuan)浮細胞則可以直接進行取樣計數；

4)     細胞懸液濃度控制在1×10⁶個細胞/mL左右。

注意：

a)      盡量少、盡量小的細胞團簇；

b)     如需計算活率，則需將細胞懸液按照1：1的比例加入等量的0.4%的臺盼藍染料，混勻后，靜置1~2分鐘。    

3、細胞加(jia)樣

1)     移液器輕吹細胞懸液使其混合均勻；

2)     將細胞懸液與臺盼藍染料按1:1體積混合均勻；

3)     取出10uL細胞懸液，將細胞懸液滴加于血細胞計數板邊緣凹槽處，此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池。

注(zhu)意：                                              

1)     每次加樣前要混勻細胞懸液，防止細胞沉降造成取樣誤差增大；

2)     加樣過程中，要一次性將細胞懸液注入計數室，防止氣泡產生，否則要重做；

3)     加樣時不要將細胞懸液直接吹入計數池，會造成細胞分布不均勻。

4、 人工細(xi)胞計數

計數(shu)工(gong)具：10X物鏡(jing)的顯微鏡(jing)、血細胞計數(shu)板。

1)     加樣后，將血細胞計數板靜置數分鐘；

2)     把血細胞計數板放置在顯微鏡的載物臺進行觀察-計數-記錄；

3)     分別計數大方格1-2-3-4中的細胞總數。

注意：

1)     計數時建議重復1-2次，取平均值，減小計數誤差；

2)     四個區域的細胞數量偏差不應超過 5%，否則要重新加樣。

3)     對橫跨刻度上的細胞，依照“數上不數下，數左不數右"的原則進行計數。

4)    為降低細胞計數誤差，濃度最好控制在1×10⁶個細胞/mL左右；

5)     計數時，只計數完整的細胞，如有聚團細胞則按一個細胞進行計數。

5、 血細胞計數(shu)板濃(nong)度計數(shu)標(biao)準

（中(zhong)國的(de)標(biao)準(zhun)：JJG 552-1988血細胞(bao)計數板試(shi)行檢定規程(cheng)）

1)     如上圖所示，當血細胞計數板放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm；

2)     平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數室，每個大方格面積為1mm²，體積為 0.1mm³；

3)     細胞濃度 (mL)=(四個大方格細胞數之和)/4X2（染液稀釋倍數）X 10⁴⁼？個細胞/mL。

注意：如果(guo)不加入(ru)臺(tai)盼藍(lan)染料，則無需乘以2。

相信(xin)有(you)些小伙伴，即使(shi)花費(fei)很長(chang)時間熟悉(xi)，并實際接(jie)觸細胞計數(shu)操作的全部流程后，還是(shi)會有(you)結(jie)果(guo)不滿意、人工操作效率低(di)、結(jie)果(guo)無法一目了(le)然、細胞計數(shu)數(shu)到“眼疼"的情況(kuang)。

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7、血細胞計數板上機(ji)實拍圖案(an)例

8、細胞計(ji)數結果包括

總(zong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)濃度(du)、活/死(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)濃度(du)、活/死(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)比率、總(zong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚團率/濃度(du)、活細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚團率/濃度(du)、死(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚團率/濃度(du)等(deng)(deng)計數(shu)結果、原始圖(tu)片(pian)、識別圖(tu)片(pian)、柱狀圖(tu)、散點圖(tu)、等(deng)(deng)高線圖(tu)、報告單等(deng)(deng)…

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